Золотистый Стафилококк Бактериологическая Диагностика Животных Фото

Особенности золотистого стафилококка, основные заболевания, диагностика, лечение

Стафилококки – это неподвижные, безъядерные, грамположительные бактерии, вызывающие у человека инфекционные заболевания. С медицинской точки зрения интерес представляют лишь несколько видов семейства Staphylococcaceae, к которым принадлежит и стафилококк ауреус.

Стафилококк, что это такое?

Микроорганизмы распространены повсеместно, в большом количестве содержатся в воздухе и почве, колонизируют кожу и внутренние органы животных.

Морфологически бактерии представляют собой шарики размером 0,6-1,2 мкм. Некоторые виды продуцируют окрашивающие пигменты. Колонии золотистого стафилококка имеют желтый или золотистый оттенок.

Патогенные и условно-патогенные стафилококки

Патогенные бактерии продуцируют агрессивные и защитные агенты — токсины, адгезины, ферменты.

Стафилококки составляют часть нормальной микрофлоры людей, заселяют различные области тела – кожные покровы, рот, носоглотку, промежность, подмышечную область, ЖКТ.

При нормальном иммунитете и отсутствии провоцирующих факторов бактерии не наносят вреда. Их активизация и переход в патогенное качество происходит при снижении иммунитета, повреждении кожи и слизистых оболочек при иных провоцирующих заболевание факторов.

Патогенность стафилококков основывается на 3-х свойствах:

• адгезивности (способность крепиться к клеткам организма);
• колонизации (размножение на тех средах, на которых они закрепились);
• инвазивности (проникновение в ткани и органы, продуцирование биологически активных агентов).

Оптимальная для жизнедеятельности стафилококка температура составляет 30-37 °C. Способность к росту и размножению сохраняется в интервале 4-43 °C, но бактерии могут выживать и в гораздо более суровых условиях.

Параметры экстремальных сред и время существования стафилококков

Параметры среды	Время существования
Температура 60 °C	1,0 час
Температура 80 °C	30 минут (некоторыештаммы)
Температура 150 °C	10 минут (некоторые штаммы)
Солнечное ультрафиолетовое излучение	10-12 час
Раствор фенола (3%)	0,15-2 час
Высушенное состояние	Около 6 месяцев
Гной	Несколько лет
6-10% раствор поваренной соли	Длительное время
Раствор хлорамина (1%)	2-5 минут
Этанол	Резистентность к чистому спирту

Разновидности бактерии

Род стафилококков насчитывает 27 видов. Некоторые из них имеют по нескольку подвидов. Инфекции у людей вызывают всего пять микроорганизмов:

1. Стафилококк золотистый (S. Aureus) — наиболее патогенный вид, вызывающий около 100 заболеваний.
2. Эпидермальный стафилококк (S. Epidermidis) —присутствует в микрофлоре кожи многих здоровых людей.
3. Staphylococcus lugdunensis – условно-патогенная бактерия, проявляющая свою патогенность в основном при имплантах.
4. Стафилококк сапрофитный (S. Saprophyticus). Инфицирует преимущественно мочевые пути.
5. Staphylococcus warneri. Локализуется обычно в пищеводе, заболевание вызывает редко, активизируется при наличии искусственных клапанов, внутривенных катетеров, вентрикулоцеребральных шунтов. Способен спровоцировать эндокардит, остеомиелит, конъюнктивит.

Важной особенностью стафилококков является синтез коагулазы – кровесвертывающего патогенного фермента. В зависимости от способности продуцировать плазмокоагулазу стафилококки подразделяются на коагулаза-отрицательные и коагулаза-положительные. Последние более патогенны.

Сапрофитный, lugdunensis, эпидермальный и warneri – коагулазонегативные стафилококки. Они часто колонизируют слизистые и кожу человека и обычно не вызывают заболеваний.

Особенности золотистого стафилококка

Staphylococcus Aureus – самый опасный вид стафилококка. Бактерия вызывает гнойно-воспалительные процессы в жизненно важных органах с развитием тяжелых осложнений, которые могут привести к смерти.

У здоровых людей (бактерионосителей) стафилококк обычно присутствует в полости носа (в 70-90 % случаев), реже в гортани, в подмышках, промежности (5-20 %), ЖКТ, на волосистой части головы.

Хроническими носителями стафилококка становятся работники медицинских учреждений (35 %), а также люди, страдающие атопическими дерматитами, наркоманы.

Наибольшее распространение имеют больничные штаммы S. Aureus. После госпитализации 20–30 % больных становятся их носителями. В большинстве случаев инфекция развивается в результате манипуляций, нарушающих целостность кожи, антибиотикотерапии, гемодиализа, лечения инсулинозависимого диабета.

Золотистый стафилококк способен формировать микрокапсулы — маленькие (0,2 мкр) круглые образования с четко ограниченным контуром. Капсулы прикреплены к стенке бактерий и защищают их от повреждений и высыхания.

Отдельные штаммы золотистого стафилококка (чаще всего больничные) приобретают резистентность к некоторым антибиотикам – цефалоспоринам и пенициллинам (Оксациллину, Метициллину, Нафциллину, Диклоксациллину). Их называют метициллин-резистентными (MRSA).

Пути передачи возбудителя

В качестве источников заражения золотистым стафилококком могут выступать:

• люди, больные стафилококковой инфекцией;
• бактерионосители;
• зараженная пища.

• контактным (через руки и вещи);
• воздушно-капельным (при разговоре, чихании, кашле);
• алиментарным (при приеме пищи, зараженной стафилококком);
• от матери к ребенку.

Важную роль в распространении стафилококковых заболеваний играют лечебные учреждения. Источниками больничных инфекций являются больные и бактерионосители среди медперсонала. Распространена передача бактерии через медицинские инструменты.

Стафилококковая инфекция

Способность поражать различные органы и ткани человеческого организма, которой отличается золотистый стафилококк, называется полиорганным тропизмом.

Локализация	Заболевания
Кожа, подкожная клетчатка	Стафилодермия, фурункулы, карбункулы, пиодермия, панариции, паронихии, флегмоны, маститы, эпидемическая пузырчатка, импетиго
Лимфоузлы	Лимфадениты
Органы дыхания	Стафилококковые бронхиты, плевриты, пневмонии
Ларингооторинологические органы	Гаймориты, отиты, тонзиллиты, ангины
Гепатобилиарная система	Холангиты, холециститы
Глаза	Язвы на роговице, конъюнктивиты
Опорно-двигательная система	Миозиты, артриты, остеомиелиты
ЖКТ	Пищевые отравления
Мозг	Менингит, абсцессы
Мочеполовая система	Уретрит, пиелонефрит, гломерулонефрит, простатит, цистит и так далее

Самые распространенные заболевания

Поражения кожи относятся к наиболее распространенным стафилококковым инфекциям. По частоте возникновения лидируют фурункулы, гнойничковые заболевания, карбункулы, пиодермия.

Пищевая инфекция (стафилококковый токсикоз). Болезнь развивается и проявляется стремительно – схваткообразными болями, тошнотой, рвотой, поносом – спустя 3-6 часов после приема инфицированной пищи. В большинстве случаев через 5-7 суток наступает самоизлечение.

Острая и хроническая пневмония. Острой форме стафилококковой пневмонии подвергаются 5-10 % всех больных воспалением легких.

Инфекция проявляется выраженной интоксикацией, одышкой, субфебрильной температурой с ознобами, кашлем с гнойной мокротой. Заболевание опасно плевральными осложнениями. В группу повышенного риска входят пожилые люди и дети раннего возраста.

Стафилококковый бронхит. Обычно начинается с инфицирование ВДП, затем болезнь распространяется на гортань, трахею и бронхи.

Остеомиелит. Возникает при заносе стафилококка в кости (обычно в поврежденные) с кровью или из соседнего очага инфекции. У взрослых чаще всего поражаются позвонки, у детей – трубчатые кости.

Менингит. Воспаление оболочки спинного и головного мозга с риском формирования абсцессов. Проявляется сильный головной болью, гиперестезией, нарушением сознания. Возможна кома. Наиболее типичным симптомом менингита является ригидность шеи (запрокидывание головы назад, и затруднение при возвращении ее в нормальное положение).

Общие симптомы

Общая симптоматика стафилококковых инфекций обуславливается интоксикацией организма с характерной клинической картиной.

• плохое самочувствие, физическая и умственная слабость;
• озноб, повышенная температура (до 39 °C);
• снижение аппетита, тошнота;
• Головная боль, головокружение;
• снижение АД;
• нарушение сна.

Болезнь способна переходить в генерализованные формы – септикопиемию или сепсис. Генерализация инфекции обуславливается распространением стафилококков по сосудистому руслу в органы – печень, легкие, кости, почки и другие, создавая там очаги инфекции. Болезни сопровождаются дискомфортом, болью, дисфункцией органов.

Тяжелые осложнения – менингит, отек мозга, сепсис могут вызывать потерю сознания и кому.

Стафилококки составляют часть нормальной микрофлоры людей, заселяют различные области тела – кожные покровы, рот, носоглотку, промежность, подмышечную область, ЖКТ.

Золотистый Стафилококк Бактериологическая Диагностика Животных Фото

Широко распространенные стафилококковые инфекции, начавшись с заболевания верхних дыхательных путей, могут сражать весь организм. В связи с преимущественным поражением тех или иных органов материалом для исследования при стафилококковых инфекциях могут быть мокрота, гной, кровь, полоскательные носоглоточные смывы, отделяемое мочеполового тракта, пищевые продукты (преимущественно молочные и кондитерские изделия), смывы с инфицированных поверхностей, рвотные массы, эксудаты, отобранные в строгом соответствии с правилами аспектики.

При анализе материала используются микроскопический, бактериологический (выделение чистой культуры микробов и их идентификация) и биологический методы.

I. МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ МЕТОД

Микроскопический метод имеет самостоятельное значение лишь при асептической работе с материалами, которые у здорового человека стерильны (например, кровь, спинномозговая жидкость). Обнаружение стафилококков при этом имеет самостоятельное диагностическое значение. В остальных случаях микроскопический метод применяется как предварительный, ориентировочный. При его использовании необходимо обращать внимание на количество микроорганизмов в каждом поле зрения (при стафилококковых заболеваниях патогенный возбудитель может вытеснить остальную микрофлору и обнаруживаться в мазках в громадных количествах), размеры гроздей (при высокой патогенности стафилококк усиленно делится, особи не успевают разойтись и дают большие грозди-скопления), величину отдельных особей (патогенные стафилококки в большинстве своем очень мелкие).

II. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Бактериологический метод — выделение чистой культуры возбудителей и их идентификация.

Стафилококки относятся к числу весьма распространенных микроорганизмов. Они обнаруживаются и у здорового человека. Поэтому для диагностики заболевания, установления его стафилококковой природы очень важно доказать патогенность выделенных бактерий. Решение диагностической задачи при этом тесно связано с выяснением вопросов эпидемиологии, лечения и профилактики данной инфекции. На этом основании бактериологический метод складывается из нескольких этапов и направлений.

1. Диагностика заболевания — выделение чистой культуры стафилококка и установление его вирулентности.
2. Выявление источников инфекции и возможных путей ее распространения — фаготипирование стафилококков, выделенных из разных, но связанных между собою источников.
3. Выбор наиболее эффективного способа лечения — определение чувствительности культур к антибиотикам и лечебному бактериофагу, в частности поливалентному пиофагу, моновалентному стафилофагу.

Все перечисленные этапы исследования отражены в схеме:

Выделение чистой культуры возбудителя должно осуществляется с учетом его культуральных особенностей галофильности (хорошее развитие в присутствии избыточного содержания поваренной соли при одновременном угнетении прочей микрофлоры), высокой потребности в белках и углеводах. Это достигается путем применения элективных питательных сред, выполняющих одновременно и функции дифференциально-диагностических.

СОСТАВ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ СТАФИЛОКОККОВ

• 7,5% солевой МПА с pH 7,2-7,4: мясная вода — 100 мл, пептон-10 г, хлористый натрий-75 г, агар-агар — 20.0. Среда стерилизуется при +100 °C -30 минут.
• МОЛОЧНО-СОЛЕВОЙ МПА готовят из 7,5% солевого МПА, но с добавлением в расплавленную и остуженную до 45 °Cреду 10-20% стерильного снятого молока. После этого производят дробную стерилизацию 3 дня подряд по 30 минут.
• КРОВЯНОЙ МПА готовится из обычного МПА при добавлении к нему 5% дефибринированпой кроличьей или бараньей крови. Использование человеческой крови нецелесообразно.

При выполнении анализа необходимо учитывать следующие возможности отклонения от типичной характеристики стафилококков.

1. Обычная грампозитивность стафилококков может теряться в процессе их изменчивости: при возникновении лекарственной устойчивости, при воздействии ультрафиолетовых лучей, лизоцима. Это надо иметь в виду при изготовлении мазков из крови, культуры с кровяного МПА.
2. Пигментообразование в последние годы перестало быть устойчивым признаком стафилококков в связи с широким применением антибиотиков и их изменчивостью. Пигмент может меняться при пересевах. Золотистый пигмент не всегда совпадает с патогенностью возбудителя, а наличие белого и других пигментов не исключает участия данного стафилококка в этиологии заболевания.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСНОВНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ВИРУЛЕНТНОСТИ

Основными показателями вирулентности стафилококков являются гемолитическая активность, выработка фермента плазмокоагулазы и некротоксичность.

При оценке степени патогенности культур широко используются тесты Гросса, согласно которым все стафилококки можно разделить на три группы. В первую группу безусловно патогенных стафилококков включают бактерии, обладающие (резкой гемолизирующей активностью, свертывающие цитратную плазму в течение 1-2 часов и располагающие выраженными некротизирующими свойствами. Вторую группу условно-патогенных или умеренно-патогенных стафилококков составляют штампы, дающие незначительный гемолиз-на агаре с 5% кроличьей или бараньей крови, свертывающие плазму позже 6 часов, а при внутрикожном введении кролику вызывающие красноту и инфильтрат. К третьей группе непатогенных стафилококков причисляют культуры, не гемолизирующие эритроциты, не коагулирующие плазму и не обладающие некротизирующими свойствами.

Таким образом, оценка вирулентности выделенного стафилококка основана на комплексном испытании трех показателей болезнетворного действия.

Вместе с тем имеются официальные указания на то, что при выделении стафилококков из молочно-кислых продуктов, особенно длительно хранившихся в холодильнике, могут исчезать отдельные, признаки патогенности при сохранении способности к токсинообраэованию в целом. Следовательно, стафилококки, у которых выпадает один из признаков патогенности, должны считаться патогенными (Инструктивное письмо института имени Эрисмана от 1967 года).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЕМОТОКСИНА выполняется путем прямого посева культуры на кровяной МПА, содержащий 5-10% дефибринированной кроличьей или бараньей крови. Добавление крови человека нежелательно, так как стафилококки, выделяющие альфа-гемолизин, человеческие эритроциты не разрушают и, следовательно, суждение о патогенности данного штамма, выделеннного от больного человека, окажется недостоверным.

Иногда в результате изменчивости стафилококков, а также при длительном хранении культур в неблагоприятных условиях гемолитическая активность последних ослабляется или вовсе исчезает. Для восстановления гемолизирующей способности бактерий целесообразно добавлять в среду, на которой испытывается гемотоксичность, редуцирующую смесь из расчета 0,015 г на каждые 10 мл среды. Смесь состоит из одной части Na₂SO₃ (сульфат натрия) и двух частей Na HSO₃ (бисульфат натрия). Восстанавливающую смесь хранят в темноте и добавляют к расплавленной среде ex tempore. С целыо сохранения гемолитичности экзотоксина у стафилококковой культуры рекомендуют также к 100 мл фильтрата культуры добавлять 100 мл насыщенного раствора Na₂S₂₃ (восстановитель) и 250 мл насыщенного раствора гидрохинона (стабилизатор). В. И. Иоффе предлагает для восстановления гемолитической активности добавлять на каждые 0,4 мл лишь 0,1 мл 1% раствора сульфата натрия Na₂SO₃.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЛАЗМОКОАГУЛАЗЫ осуществляется путем посева культуры стафилококка в узкую пробирку с 0,5 мл 5% кроличьей или человеческой цитратной плазмы. Посевы помещают в термостат на 6-10 часов с регистрацией результатов через 1, 2, 3 и 6 часов. Плазма человеческой крови дает непостоянные результаты, а донорская плазма с глюкозой и мертиолятом вообще не пригодна. В случае же невозможности замены человеческой плазмы ее используют только после 10-кратного разведения физиологическим раствором.

Наряду с классическим методом определения плазмокоагулазы применяется также реакция плазмокоагуляции на стекле или ускоренный «слид-тест». Этот методический прием основан на способности коагулазоактивных стафилококков склеиваться плазмой крови и коагулировать ее. Коагулазо-отрицательные штаммы таким свойством не обладают. Для выполнения реакции берут каплю воды, суспендируют в ней испытуемую культуру, после чего добавляют одну каплю разведенной плазмы крови кролика или человека. Через 15-60 секунд образуется плазменный сгусток. Более поздняя (позже минуты) реакция считается сомнительной, а реакция, наступившая через 3 минуты,- отрицательной.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕКРОТОКСИНА производится путем внутрикожного введения кролику 0,2 мл взвеси 2 млрд, суточной агаровой культуры стафилококка в физиологическом растворе. Наблюдение за животным ведется в течение 24-48 часов. Как положительная реакция расценивается лишь инфильтрат с желтоватым центром, темным ободком и ярко-красной каймой по периферии с последующими явлениями некроза.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПАТОГЕННОСТИ СТАФИЛОКОККОВ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТА ГИАЛУРОНИДАЗЫ осуществляется путем испытания культуры на субстрате, содержащем гиалуроновую кислоту. В качестве последней используются экстракт из пупочных канатиков новорожденного. Для этого пупочные канатики в количестве 3-5 штук, собранные в 0,5% раствор карболовой кислоты, тщательно отмывают от крови дистиллированной водой, очищают от сосудов, мелко нарезают и дважды пропускают через мясорубку. Затем полученный фарш взвешивают и заливают полуторным объемом дистиллированной воды, после чего в течение 30 минут оставляют при комнатной температуре, периодически встряхивая. Далее всю эту массу выливают в воронку с 2-3 слоями стерильной марли, отфильтровывают, отжимают, бросают на минуту в кипящую воду, количественно соответствующую первоначальному весу измельченных канатиков. Дают вскипеть. Жидкость быстро фильтруют через двойной слой стерильной марли в стерильные пробирки и в каждую из них для консервирован,ия субстрата добавляют несколько капель хлороформа. Затем пробирки закрывают ватной пробкой и ставит на холод для сохранения. Эстракт остается при этих условиях почти неизменным в течение нескольких месяцев.

Проба на гиалуронидазу выполняется в два этапа. Первым из них является определение рабочей дозы гиалуроновой кислоты (опыт ставят лишь 1 раз после приготовления экстракта и повторяют 1-2 раза в месяц при длительном хранении), вторым — выявление фермента гиалуронидазы.

Схема определения рабочей дозы и титра гиалуроновой кислоты
Реагенты	Пробирки и их содержимое в мл
	1	2	3	4	5	6
Экстрат гиалуроновой кислоты	0,1	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6
Диетил. вода или физ. раствор	0,9	0,8	0,7	0,6	0,5	0,4
В термостат при +37 °C на 15 мин.
15% раствор укс. кислоты (индикатор)	2 к	2 к	2 к	2 к	2 к	2 к
Результат (образование сгустка	—	+	+	+ +	+ + +	+ + + +

Пробирки помещают в термостат при 37 °C на 15 минут, после чего добавляют 2-3 капли 15% раствора уксусной кислоты, осторожно встряхивают и по образованию сгустка читают результаты. Титром гиалуроновой кислоты считается ее минимальное количество, которое при действии уксусной кислоты дает четкий сгусток. В данном примере титр гиалуронового субстрата 0,2 мл. Это же количество принимается за рабочую дозу.

Схемы определения гиалуронидазной активности культур см ниже.

Все содержимое пробирок перемешивают, ставят сначала в термостат на 15 минут, затем на холод — на 5 минут и добавляют 2-3 капли 15% уксусной кислоты. Наличие гиалуронидазы у бактерий регистрируется по отсутствию сгустка в опытной пробе. В контрольной пробирке должен проявиться хороший сгусток за счет присутствия здесь цельной гиалуроновой кислоты.

Для более точного количественного определения гиалуронидазной активности испытуемой культуры проба ставится по следующей развернутой схеме.

Схема определения гиалуронидазной активности культур
Компоненты	Пробирки
	1	2
	(основная проба)	контроль гиалуронидазовой кислоты
Экстракт гиалуроновой кислоты в рабочей дозе (в мл)	0,2 мл	0,2 мл
Фильтрат — фермент или 2 млрд. взвесь микробов в физиологическом растворе (в мл.)	0,3 мл	—
Дистил. вода или физ. раствор (в мл.)	0,2	0,5 мл
В термостат при +37 °C на 15-30 мин, затем на холод на 5 минут для прекращения действия фермента
15% раствор уксусной кислоты	2 капли	2 капли

Схема количественного определения гиалуронидазной активности
Компоненты в мл	Пробирки
	1	2	3	4	5	6
						контроль гиалуроновой к-ты
Экстрат гиалуроновой кислоты в раб. дозе (в мл)	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2	0,2
Взвесь бактерий 2 млрд. (в мл)	0,5	0,4	0,3	0,2	0,1	—
Дистил. вода или физ. раствор в мл	0,2	0,3	0,4	0,5	0,6	0,7
Выдержать в термостате, на холоде добавить индикатор 15% уксусную кислоту
Результат (образование сгустка)	—	—	—	+	+	+

Титр гиалуронидазной активнсти культуры в данном примере 0,3 мл.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФИБРИНОКИНАЗЫ основано на способности стафилококка лизировать фибринные сгустки свежей крови. Для испытания берут 0,5 мл бульонной суточной культуры стафилококков, вносят в 0,2 мл свежей человеческой плазмы или крови с 0,8 мл физиологического раствора. Затем осторожно перемешивают, предварительно добавив 0,5 мл 0,25% раствора хлористого калыция. Контролем в данной реакции служит пробирка со всеми теми же компонентами, но без бактерий. Пробирки помещаются в термостат при 37 °C. В течение первых 15 минут наступает свертывание. C этого момента следят за ходом растворения образовавшегося сгустка. Обычно патогенные культуры обеспечивают полный фибринолизис в течение 24 часов.

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ КУЛЬТУР НА СРЕДЕ ЧЕПМЕННА. Приготовление среды: к 1 л 3,5% МПА добавляют 3,3 мл 0,1% водного растзора генцианвиолета или кристал-виолета. Готовую среду разливают в чашки. После застывания она имеет серовато-сиреневый цвет. Патогенные стафилококки дают на ней фиолетовые или оранжевые колонии, непатогенные — белые или сиреневые.

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ПАТОГЕННЫХ СТАФИЛОКОККОВ ПО ОТНОШЕНИЮ к манниту осуществляется на жидкой среде Гиоса, содержащей 0,5% многоатомного спирта — маннита. Патогенные стафилококки маннит разрушают через 36 часов, непатогенные значительно позже. Этот признак весьма неустойчив и самостоятельным показателем патогенности не является.

УСКОРЕННЫЙ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ
И ИНДЕНТИФИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ СТАФИЛОКОККОВ ПО ПЕТРУ ДАНИЛА

Метод основан на комплексном использовании обычного кровяного МПА с бараньими эритроцитами и среды с маннитом, хлористым натрием и теллуритом калия, рецепт которой разработан Петру Данила.

СРЕДА ПЕТРУ ДАНИЛА ИМЕЕТ СЛЕДУЮЩИЙ СОСТАВ: дистиллированная вода-100 мл; пептон — 0,5 г; хлористый натрий -10 г; маннит или лактоза-0,5 г; теллурит калия-0,5 г; бромтимоблау — 0,004 г.

Приготовление среды: в теплой воде растворяют пептон, соль, добавляют 2 мл раствора бромтимолбау (0,1 г на 3,2 мл N/20 раствора едкого натрия и 50 мл дистиллированной воды), стерилизуют при +120 °C в течение 15 минут. После охлаждения добавляют 5 мл 10% водного раствора маннита или лактозы, простерилизованного кипячением и 5 мл 1 % водного раствора теллурита натрия, простерилизованнаго в автоклаве. Среда темно-зеленая, pH -7,6. При синем цвете в нее добавляется несколько капель 10% соляной кислоты. Среду разливают по 1-2 мл в пробирки.

Пожелтение среды Петру Данила через 24 часа после посева культуры и гемолиз вокруг колоний стафилококка свидетельствуют о выделении патогенных бактерий.

УСКОРЕННАЯ КОМПЛЕКСНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПАТОГЕННОГО СТАФИЛОКОККА ПО ПЕТРУ ДАНИЛА

Дифференциация патогенных стафилококков производится в одной пробирке. Метод основан на способности патогенных стафилококков агглютинироваться в присутствии человеческой плазмы, коагулировать ее, а также вызывать при этом агглютинацию гомологичных эритроцитов. Для выполнения пробы к 1 мл нитратной человеческой плазмы добавляют 10 мл физиологического раствора и 0,05 мл осевшей под плазмой эритроцитарной массы. Пробирку встряхивают и 0,5 мл смеси переливают в другую пробирку. Сюда же вносят как можно больше культуры стафилококка, которую осторожно растирают на стенке пробирки близко от жидкого субстрата, слегка прикасаясь к его поверхности. Растирание продолжают до получения гомогенной взвеси. Патогенный стафилококк агглютинируется плазмой, и гомогенизации не происходит, непатогенный — образует равномерную гомогенную массу.

Далее пробирку помещают в термостат при температуре +37 °C и проверяют агглютинацию эритроцитов в собственной плазме. При этом каждый час контролируется коагуляция плазмы.

Патогенные стафилококки при растирании культуры в плазменном субстрате образуют зернистую негомогенную взвесь, а после инкубирования в термостате вызывают гемагглютинацию эритроцитов и плазмокоагуляцию. Непатогенные штампы образуют при этом равномерную мутную взвесь, а коагуляции плазмы и склеивания эритроцитов не наступает.

Таб. 1. Типы фагов
Группа	Бактериофаги
I	29, 52, 52А, 79, 80
II	3А, 3В, 36, 55, 71
III	6, 7, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А
IV	42Д
V	81 и 187

В различных местностях циркулируют разные фаготипы стафилококков. Поэтому определение их у стафилококковых культур имеет большое значение для выяснения возможного источника инфекции и путей ее распространения.

Среди плазмокоагулирующих стафилококков по номенклатуре Международного Комитета по фаготипированию различают 22 типа фагов (таб.1):

Определение лизируемости стафилококков названными бактериофагами выполняется следующим образом.

ПОДГОТОВКА КУЛЬТУР К ФАГОТИПИРОВАНИЮ

1. Определение плазмокоагулирующей способности культур (бактериофагами цитируется только коагулазоположительные штаммы).
2. Подготовка культуры: носер в МПБ с pH -7, 2-7, 4, выращивание при +37 °C 18-24 часа.
3. На следующий день — пересев в свежий МПБ с тем же pH, подращивание культуры в термостате в течение 3 часов.

ФАГОТИПИРОВАНИЕ

1. Чашки со свежеприготовленным 1,25% МПА подсушить в термостате в течение 1-1,5 часов.
2. Разделить дно чашки карандашом по стеклу на 23-24 квадрата, в каждом из которых подписать типы испытуемых бактериофагов.
3. Засеять чашку 0,2 мл 3-4 часовой культуры выделенного стафилококка и равномерно распределить шпателем по поверхности среды.
4. Подсушить посев в термостате при +37 °C в течение 30-45 минут.
5. В каждый квадрат петлей нанести каплю соответствующего бактериофага в десятикратном разведении (1:10), произведенном в бульоне Хоттингерa.
6. Каплю фага подсушить, чашки поставить в термостат на 18-20 часов в перевернутом виде.
7. Учет результатов и определение фаготипа стафилококка производится по наличию стерильного пятна на месте лизиса культуры.

Положительным считается результат, степень лизиса при котором определяют не менее как на 2 плюса. В этом случае зона лизиса составляет около 50% площади в месте нанесения бактериофага.

Во многих случаях культуры стафилококков лизируются не одним, а несколькими фагами, образуя своеобразую фагомозаику из стерильных пятен. Стафилококки, обнаруживающие одну и ту же мозаику или отличающиеся на 1 фаг, считаются идентичными.

Биологический метод диагностики применяется только при подозрении на пищевую интоксикацию, вызванную энтеротропными стафилококками, выделяющими энтеротоксин. Принцип его сводится к скармливанию остатков пищи, подозрительной на инфицированность стафилококком, выделенной культуры, промывных вод. Лучшей биологической моделью при этом являются 1,5-2-месячные котята (для исследования культуры) и взрослые кошки (при выявлении энтеротоксина). При капельных стафилококковых инфекциих этот метод не применяется.

Рекомендуемая литература:

1. Руководство по диагностике инфекционных заболеваний под ред. проф. К. И. Матвеева и М. И. Соколова. 1964, стр. 549-553, 489-492.
2. Предтеченский Б. Е. Руководство по клиническим лабораторным исследованиям, стр. 719-774, 776-786, 890- 896.
3. Дяченко С. С. Микробиологические методы диагностики инфекционных заболеванияй, стр. 307-313.
4. Руководство но микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных заболеваний, т. VI, разд. VI, стр. 475- 487.
5. Сборник схем бактериологического исследования при некоторых инфекционных заболеваниях. Методическое пособие для врачей-курсантов заочников, под ред. проф. П. Н. Кашкина, 1965, стр. 4
6. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргер, 1967, стр. 7-16, 250-254.
7. Выгодчиков Г. В. Стафилококковые инфекции. Медгиз. 1963.

Источник: Мотавкина Н.С., Пьянова Р.Е. Микробиологическая диагностика некоторых капельных инфекций и токсоплазмоза. Методическая разработка для студентов. ВГМУ, 1973

Все перечисленные этапы исследования отражены в схеме:

Основные симптомы и опасность золотистого стафилококка у взрослых

В организме человек присутствует множество бактерий и вирусов. Они составляют условно-патогенную флору и не приносят вреда. Но в случае снижения иммунитета или при влиянии различных факторов они начинают стремительно размножаться, становясь причиной появления ряда неприятных симптомов. К подобным бактериям относится золотистый стафилококк, который может привести к серьезным последствиям.

Что такое золотистый стафилококк?

Золотистый стафилококк является самым распространенным и опасным видом бактерий из рода стафилококков

Бактерия имеет шарообразную форму и относится к роду стафилококков. Они могут сохраняться на слизистых оболочках и кожном покрове достаточно длительное время. Но не во всех случаях патогенные микроорганизмы становятся причиной развития определенных заболеваний. В некоторых случаях человек является носителем. По последним данным ученых, таких людей около 40%.

Носительство, в зависимости от многих факторов, может быть переходящим или постоянным. Бактерия может быть обнаружена в кишечнике, носовой полости, горле и на поверхности слизистой оболочки половых органов. Именно подобная распространенность бактерии и сказывается на количестве заболеваний, которые провоцирует стафилококк.

Он хорошо переносит даже высокую температуру и высушивание.

Гибель бактерий возможна только при +70 градусов. При этом продолжительность воздействия высокой температуры должна составлять не менее 15 минут. Мгновенная гибель золотистого стафилококка наблюдается при +150 градусов.

Самым распространенным заболеванием, которое вызывает микроорганизм, является пищевое отравление, которое проявляется сильными болями в животе, рвотой, поносом и рядом других симптомов. Стафилококк способен размножаться на пищевых продуктах. В большом количестве он может находиться в масляных кремах, мясных салатах и консервах.

Пути передачи и причины развития

Существует несколько путей заражения золотистым стафилококком

Заражение происходит при передачи инфекции следующими способами:

1. Воздушно-капельный. Возможен только в тех случаях. Когда бактерии попадают в окружающую среду вместе с выдыхаемым воздухом, когда поражают верхние дыхательные пути или провоцируют развитие бронхитов или пневмонии.
2. Контактно-бытовой. Заражение происходит при использовании предметов быта, на поверхности которых обитает микроорганизм.
3. Пищевой. Инфицирование возможно при употреблении зараженных продуктов.
4. Фекально-оральный. Проникновение бактерии в организм человека происходит в случае, когда человек после посещения туалета не помыл руки. Бактерии, содержащиеся в кале или рвотных массах, таким образом попадают на продукты питания и предметы быта.
5. Заражение возможно при использовании врачом медицинских инструментов, когда были нарушены правила стерилизации.

После попадания в организм, где для бактерии достаточно благоприятная среда, микроорганизмы начинают стремительно размножаться, оказывая негативное влияние на здоровье человека.

Больше информации о золотистом стафилококке можно узнать из видео: